在电化学发光免疫测定（electrochemluminescenceimmunoassay，ECLI）中应用的标记物为电化学发光反应的底物三联吡啶钌，其衍生物N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯可通过化学反应与抗体或不同化学结构的抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。ECLI的测定模式与ELISA相似，分二个步骤进行。以双抗体夹心法测定抗原为例，第一步在试管中进行，反应物为Ru(bpy)₃²⁺标记的抗体、吸附在磁性微球上的固相抗体以及受检的标本，反应式如图18-2。

图18-2 ECLI中的抗原抗体反应

反应后除由标记抗体、固相抗体与标本中的抗原形成的夹心复合物外，尚有多余的标记抗体和固相抗体。第二步是将反应液输入特殊的检测仪器的反应室中（图18-3），随即用含三丙胺（TPA）的缓冲液冲洗。反应室电极下有磁铁。含磁性微球的夹心复合物及游离的固相抗体被吸附在电极表面，游离的标记抗体随冲洗液流出。此时在反应室中即发生如图18-1的电化学发光反应。发出的光由光电倍增管转为信号，通过电信号的测定反映标本中抗原的含量。

图18-3 ECLI中的ECL反应

ECLI具有以下优点：①标记物在再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易于测定；②敏感度高，可达pg/ml或pmol水平；③线性范围宽，＞10⁴；④反应时间短，20min以内可完成测定；⑤试剂稳定性好，2～5℃可保持一年以上。