Kbaffan等（1986）首先创立了蓝色荧光素标记和染色技术，可进行双标记或多标记。

（1）取7-氨基-4-甲基香豆素（7-amino-4-methyl coumarin, AMC）260μg溶于二甲亚砜25μl中。

（2）将上液加入10ml IgG的 巴比妥缓冲液（0.5mol/L,pH8.5,内含50～100mg IgG）中，室温反应2h，过Sephadex G-50除去游离荧光素。

AMC呈黄色结晶固体，最大吸收波长354nm,最大荧光波长430nm。