（1）1mm厚组织块，在4^℃下用固定液固定后，置于含4.5%的蔗糖PBS（0.05mol/l pH7.2），4^℃中漂洗，换数次固定液，过夜。

（2）随后，作10～40μm的冰冻切片，放入第一抗体血清作用12～18h，4℃，用含蔗糖的PBS洗数次。

（3）置于HRP标记抗体液（第二抗体）4^℃过夜。然后用4℃含蔗糖PBS反复冲洗数次。4^℃浸漂过夜。

（4）2.5%戊二醛（pH7.4磷酸缓冲液）再固定1h，4^℃用含蔗糖PBS反复冲洗去戊醛，每次5min，共洗3次。

（5）DAB-H₂O₂显色15～30min。

（6）0.05mol/l PBS冲洗3次，每次30min，再置于室温中用1%～2%锇酸固定1h，脱水、包埋、切片复染和观察。