2.1 尿素酶快速诊断 Hp能产生大量的尿素酶,分解尿素产生氨,使pH值升高,据此将尿素酶液全培养基颜色由桔黄色变为粉红色的反应定为阳性反应。试验结果如表1所示:
表 1 不同时间尿素酶快诊结果
时间(h) | 受检标本数 | 合计 | 阳性率(%) | |
阳性 | 阴性 | |||
4 | 165 | 135 | 300 | 55 |
24 | 186 | 114 | 300 | 62 |
从表中看出,4h和24h尿素酶快诊的阳性率分别为55%和62%。在300份胃病患者的胃粘膜Hp培养中,有195例为阳性。阳性率为65%,与4h尿素酶快诊阳性率之间无显著性差异,(P>0.05)。尿素酶快诊阳性结果与Hp培养阳性结果之间的对应关系良好,培养出的195例Hp菌株作尿素酶快诊,在1min内均呈阳性反应,特异性达100%。而4h和24h尿素酶快诊的敏感性分别为84.6%(165/195)。因此用尿素酶作Hp快诊,在早期及Hp培养后进行,均有其非常特异而重要的意义。
2.2 直接涂片镜检 对其中21例作了直接涂片镜检,结果有4例镜下可见成簇Hp(+++)占19.0%;有1例镜下易找到Hp(++),占4.8%;有9例镜下可见Hp零星存在(+),占42.9%;6例镜检为阴性。镜检阳性率为66.7%。21例Hp 培养阳性为16份,阳性率为76.2%,与镜检阳性率之间无显著差异(P>0.05)。镜检阳性符合率为87.5%(14/16)。
2.3 Hp的运送、培养及生化反应
2.3.1 运送Hp生长的营养条件很高,而从采样到分离培养需要一段时间,送检中保存问题当然重要,有文献报道将胃粘膜标本浸在20%葡萄糖液体内送检,5h之内不会影响阳性率。为了探索一条保存时间长、效果好的方法,我们试用含10%小牛血清的布氏肉汤作标本保存液,4°C冰箱保存,用冰壶送检,随机对300例胃粘膜标本进行了不同时间的分离培养,所用平皿是新配制或在密闭条件下保存备用的,增养结果是保存1~8h的标本阳性率为47.5%~78.6%,有1例标本不保存液中存放了17d后Hp培养仍阳性。
2.3.2 培养300例胃粘膜标本,培养Hp结果有195份阳性,阳性率为65.0%。菌落形态:37°C微氧条件下培养72h后,可见0.5~1mm直径大小、圆形、扁平、湿润、半透明的灰白色菌落,偶尔可见菌落周围有β微溶血现象。菌体形态:显微镜下菌体呈弧型、S型或海鸥展翅状,与空肠弯曲菌相类似。72h镜检菌体呈弧形或弯曲状,比空肠弯曲菌要大,着色较好。五日以上菌体呈多形状,有直杆形、微弯曲型或球形,着色不均匀。
2.3.3 生化反应 Hp的氧化酶、过氧化酶、尿素酶均为阳性反应。其中尿素酶反应的时间与细菌浓度成反比。葡萄糖发酵、硝酸盐还原、及3.5%NaCl反应均为阴性。马尿酸水解反应84.1%为阴性,15.9%为弱阳性。1%甘氨酸反应87.0%为阳性。0.04%2、3、5TTC反应8.6%为阳性。
2.4 药敏试验 选取22株生长良好的Hp菌作药敏试验,结果如表2所示.从表中可以看出:Hp对链霉素、四环素、氯霉素、先锋霉素、利福平、卡那霉素、红霉素、新霉素及大霉素较为敏感。而对复方新诺明、萘啶酮酸和多粘菌素B有耐受作用。另外,选用8株Hp对中医研究院研制的五种中药即Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ号及胃丹C进行了药敏试验,结果表明作用减弱,抑菌环直径分别为16~20mm,20mm,10~20mm,0mm及10~14mm。
表2 22株Hp的药敏试验结果
抗生素 | 药敏片药量(μg) | 敏感菌株数 | 抑菌环直径范围 | 平均直径(mm) |
新霉素 | 30 | 21(95.5) | 16~28 | 24.4 |
庆大霉素 | 10 | 21(95.5) | 14~38 | 22.3 |
四环素 | 30 | 22(100.0) | 26~36 | 33.8 |
磺胺嘧啶 | 300 | 22(100.0) | 10 | 10.0 |
红霉素 | 30 | 2(9.1) | 22~40 | 25.4 |
痢特灵 | 300 | 20(90.9) | 10~40 | 17.9 |
氯霉素 | 30 | 19(86.4) | 24~38 | 28.6 |
青霉素G | 10 | 22(100.0) | 12~30 | 20.8 |
呋喃坦丁 | 300 | 20(90.9) | 12~50 | 21.9 |
卡那霉素 | 30 | 21(95.5) | 12~28 | 25.3 |
萘啶酮酸 | 30 | 1(4.5) | 8 | 8.0 |
先锋霉素 | 30 | 20(90.9) | 12~34 | 26.5 |
复方新诺明 | 25 | 0(0.0) | 0.0 | |
链霉素 | 10 | 22(100.0) | 16~40 | 32.3 |
氨苄青霉素 | 10 | 3(13.6) | 12~14 | 12.7 |
利福平 | 5 | 20(90.9) | 18~32 | 28.9 |
多粘菌素B | 300IU | 1(4.5) | 16 | 16.0 |
黄连素 | 100 | 21(95.5) | 8~24 | 15.6 |
托布霉素 | 10 | 21(95.5) | 10~30 | 21.9 |
丁胺卡那霉素 | 10 | 21(95.5) | 12~28 | 23.5 |
注:( )内敏感百分比
2.5 杀菌杆菌抗体 对40份受检胃病患者的血清进行了杀Hp抗体的检测试验,结果见表3。根据诊断标准 ,杀Hp抗体滴度≥1:160时为阳性,则杀Hp抗体检测试验的实际阳性率为57.5%。对应40份患者胃粘膜标本Hp培养阳性者为29份,阳性率为72.5%,与杀Hp抗体试验的阳性率之间无显著性差异(P>0.05)。
2.6 动物试验结果 ①尿素酶快诊仅BALb/c小鼠呈阳性反应,其他小鼠均为阴性。而正常BALb/c小鼠胃粘膜的尿素酶快诊也偶尔呈阳性反应,因此推测尿素酶阳性者不一定是Hp感染,由何引起有待进一步研究。②Hp培养均为阴性。③尿素本科阳性的BALb/c小鼠的胃粘膜病理组织切片检查,可见粘膜上皮中有嗜酸性染色的杆菌存在,在大量白细胞,偶尔可见形态类似螺杆菌的细菌的存在。
表3 杀幽门螺杆菌抗体试验结果
稀释度 |
1:10 |
1:20~1:80 |
1:160~1:640 |
1:1280~1:5120 |
合计 |