一、化学法（消化法）

1．原理

以有机混合试剂（无水乙醇、乙醇）抽提血清中磷脂，再用浓硫酸和过氯酸消化抽提液中的脂类和其他有机化合物，用硝酸盐与磷反应生成有色化合物，比色定量。本法可用组织细胞磷脂的抽提定量。

2．试剂组成

代号 种类 浓度 组成 贮2～8℃ 有效时间
R-1 抽提液 无水乙醇：乙醇=3:1
R-2 消化液 用1L密器，加水约500ml，置冷水中缓缓加浓硫酸280ml到水中，冷却后加过氯酸（70%，AR）65ml，混匀，加蒸馏水至1000ml
R-3 显色剂 钼酸铵（A.R）2.5g+无水醋酸钠8.2g，加蒸馏水溶解并稀释至1L，监用时取此液体9份加新配的VitC液（10%）1份，混合即可
R-4 参考液（贮存液）1mg/L 称干燥KH2PO（A.R）0.4393g,溶于蒸馏水中，转移至100ml的容量中，用蒸馏水加至刻度。 冷藏
R-5 参考应用液 0.04mg/ml 取贮存液2ml加至50ml容量中，加水至刻度 冷藏

3．操作

按图15-5操作。

4．计算

血清脂性磷浓度=ESA/EST×10(mg/dl)

血清磷脂（以卵磷脂计）=ESA/EST×10×0.3229(mmol/L)

血清磷脂测定（消化法）操作图*采用带塞玻璃试管

图15-5 血清磷脂测定（消化法）操作图*采用带塞玻璃试管

二、酶法

1．原理

磷脂酶D因特异性不高，能水解血清中卵磷脂，溶血卵磷脂和神经磷脂（三者占血清总磷脂的95%），释放出胆碱，胆碱在胆碱氧化酶作用下生成甜菜碱和H2O2，在过氧化物酶作用下，H2O2，4-氨基安替比林、酚发生反应生成红色醌亚胺化合物，其颜色深浅与这三种磷脂的含量成正比，在500nm波长下比色计算结果为：

2．试剂

（1）酶应用液（参考配方）：每100mlTris-His缓冲液（50mmol/L，pH7.8）中含：

磷脂酶D 45U
胆碱氧化酶 100U
过氧化物酶 220U
4-氨基安替比林 12mg
酚 20mg
CaCl2·2H2O 8mg
TritonX-100 0.2g

(2)标准液：纯卵磷脂，临用前配制，5mg/2.5ml蒸馏水（含TritonX-1000.5%）

3．操作

（1）标本采集：空腹12h抽静脉血，不抗凝，分离血清或抗凝血分离血浆。

（2）在3.0ml酶应用液中加入血清（浆）20μl，标准管加标准液20μl，空白管加水20μl，放置37℃水浴10min后，波长500nm，比色，空白管液调零。

4．计算

血清磷脂（mg/dl）=TA/SA×200

血清磷脂（mmol/L）=血清磷脂（mg/dl）×0.01292