1.原理
磷脂酶D因特异性不高,能水解血清中卵磷脂,溶血卵磷脂和神经磷脂(三者占血清总磷脂的95%),释放出胆碱,胆碱在胆碱氧化酶作用下生成甜菜碱和H2O2,在过氧化物酶作用下,H2O2,4-氨基安替比林、酚发生反应生成红色醌亚胺化合物,其颜色深浅与这三种磷脂的含量成正比,在500nm波长下比色计算结果为:
2.试剂
(1)酶应用液(参考配方):每100mlTris-His缓冲液(50mmol/L,pH7.8)中含:
磷脂酶D | 45U |
胆碱氧化酶 | 100U |
过氧化物酶 | 220U |
4-氨基安替比林 | 12mg |
酚 | 20mg |
CaCl2·2H2O | 8mg |
TritonX-100 | 0.2g |
(2)标准液:纯卵磷脂,临用前配制,5mg/2.5ml蒸馏水(含TritonX-1000.5%)
3.操作
(1)标本采集:空腹12h抽静脉血,不抗凝,分离血清或抗凝血分离血浆。
(2)在3.0ml酶应用液中加入血清(浆)20μl,标准管加标准液20μl,空白管加水20μl,放置37℃水浴10min后,波长500nm,比色,空白管液调零。
4.计算
血清磷脂(mg/dl)=TA/SA×200
血清磷脂(mmol/L)=血清磷脂(mg/dl)×0.01292