1．单向免疫扩散法（radialimmunodiffusion,RID）

该法较简单，一般实验室均可进行。消耗较多的抗血清，扩散过程至少24h，最多需72h，测定下限值为10μg/ml。该方法虽然简单，应严格控制有关条件如：含抗血清的琼脂糖凝胶厚度要均匀；加入小孔的稀释抗原（血清）量要准确；含ApoB的脂蛋白如VLDL和LDL颗粒大小不一，如琼脂糖凝胶浓度在1.5%～2.0%,可能仅测出LDL的ApoB，大颗粒的LDL及VLDL的ApoB可能无法测出，因为难以穿过琼脂糖凝胶的孔隙。另外，扩散过程中，凝胶板一定要水平，否则易使扩散环呈椭圆形，难以准确测量直径。一般使沉淀环以3.5～10.0mm为宜，应在两个方向测量直径，其精度要求达到0.1mm。采用五种不同浓度参考值，测定沉淀环面积对相应浓度关系以曲线回归方程作图。

2．电免疫测定法（electroimmunoassay,EIA）

该法灵敏，抗血清用量少，如琼脂糖缓冲液中加入聚乙二醇及甘氨酸，其电泳时间可缩短一倍，火箭峰高以1～4cm为宜，火箭峰的测量可以计算面积或峰高，峰高从中心量起。测量精度最好能在0.1mm,灵敏度约2μg/ml，又称为火箭电泳法。

3．免疫比浊法(immunoturbidimetryassay,ITA）

简便快速，在自动分析仪进行操作并能批量检测，是目前临床使用最多的方法学。免疫比浊法有两种：一是测定光散射的，又名免疫散射比浊法（INA）；需用特殊的激光浊度仪；另一种是利用光度计测定通过混浊溶液后的透光强度，称为透射免疫比浊法（ITA），其灵敏度低于INA。比浊法可以终点法和速率法测定，速率法是根据散射光强度与时间的关系，以微机处理计算出抗原抗体复合物形成的最大反应速度，后者与溶液中抗原量成正比，常可在1min内完成测定过程，可自动扣除空白；终点法比速率法稳定，一般多用终点法。

4．酶联免疫法（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）

该技术已广泛应用于极微量蛋白的定量测定，可测出ng级水平的抗原或抗体含量，该法可用于ApoE、C-Ⅱ、C-Ⅲ等含量较少的载脂蛋白的定量测定。

5．放射免疫法（radioimmunoassay,RIA）

该法灵敏，抗血清用量少，所需设备较多，一般用125I标记抗原作为示踪物，除ApoC-Ⅰ（不含酪氨酸）以外，都可以作碘标记（氯胺T法），以双抗体法测定RIA法可检测最低至3～5ng。临床检验中不常用此法，主要用于动物实验的科学研究工作。

还有荧光免疫法和化学发光法等灵敏度很高的方法。

血清载脂蛋白测定的方法，从测定原理、方法学评价及参考值，刘秉文和李健斋等人作了大量的工作，为国内的载脂蛋白测定的临床应用奠定了基础。周新曾于1986年首先在国内研制成功抗人ApoB100血清，其后，国内同仁陆续研制出ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、E、CⅡ、CⅢ抗血清，并广泛应用于临床的疾病诊断，在部分大医院已成为常规检查项目。

刘秉文在“脂蛋白与动脉粥样硬化“一书中全面总结了国内外载脂蛋白测定的方法学及其参考值，本节将引用如下比较表：

表18-1　ApoAⅠ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID INA ITA
抗体 P，M P，M P P，M P P
灵敏度（n） 0.3～10 0.1～0.5 100 100 150 100
测定范围（ng） 1～200 0.5～15 100～500 200～800 200～500 200～600
批内CV（%） 3～9 4～8 3～5 6 3～7 1
批间CV（%） 5～10 8～10 3～9 10 6～7 6
正常值（g/L） 1.0±0.2 1.5±0.2 1.2±0.2 1.2±0.1 1.2±0.2 1.7±0.2

P:多克隆抗体；M：单克隆抗体；RIA：放射免疫法；ELISA；酶联免疫法；RID：单向免疫扩散法；INA：免疫散射比浊法；ITA：免疫透射比浊法。

（源自：刘秉文，1995.）

表18-2 ApoAⅡ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID INA ITA
抗体 P P，M P P P P
灵敏度（g） 0.5 20 5 30 20
测定范围（ng） 1～20 5～50 30～60 50～400 50～900 40～150
批内CV（%） 7 8 5 5 5 5
批间CV（%） 9 7 8 - 7 6
正常值（g/L） 0.25±0.4 0.35±0.05 0.76±0.2 0.29±0.02 0.37±0.09 0.36±0.03

（源自：刘秉文，1995.）

表18-3 ApoAⅣ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA
抗体 P P P
灵敏度（g） 5 0.2 20
测定范围（ng） 5～50 0.5～8 50～200
批内CV（%） 5 3.60 5
批间CV（%） 7 8 9
正常值（g/L） 0.17±0.03 0.14±0.05 0.14±0.04

（源自：刘秉文，1995.）

表18-4 ApoB100免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID INA ITA
抗体 P，M P，M P P，M P P
灵敏度（n） 5～10 2～20 50～300 300 300 300
测定范围（ng） 0～100 2～10 20～500 50～600 300～500 100～500
批内CV（%） 4～8 4～7 1～7 3～7 4～7 2
批间CV（%） 7～11 10 3～10 6～7 7～8 2
正常值（g/L） 0.9±0.2 0.85±0.1 0.6±0.3 0.8±0.2 0.8±0.2 0.8±0.3

（源自：刘秉文，1995.）

表18-5 ApoCⅠ免疫测定法的比较

RIA ELISA INA
抗体 P P P
灵敏度（n） 1 5 50
测定范围（ng） 5～30 15～100 -
批内CV（%） 7 3 5
批间CV（%） 9 5 8
正常值（g/L） 0.05±0.03 0.06±0.002 0.06±0.01

（源自：刘秉文，1995.）

表18-6 ApoCⅡ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID ITA
抗体 P P P P P
灵敏度（g） 10 0.3 45 40 10
测定范围（ng） 10～80 0.5～5 70～600 40～600 12～50
批内CV（%） 6 3 6.5 2.1 3.3
批间CV（%） 10 8 8.2 3.9 6.2
正常值（g/L） 0.04±0.01 0.033±0.008 0.04±0.002 0.039±0.017 0.04±0.01

（源自：刘秉文，1995.）

表18-7 ApoCⅢ免疫测定法的比较

RIA ELISA EIA RID INA ITA
抗体 P P P P P P
灵敏度（g） 1 0.3 10 76 20 15
测定范围（ng） 2～20 1～6 20～80 76～600 50～400 30～120
批内CV（%） 13 4.3 8 2.5 6.3 5.2
批间CV（%） 13 4.3 8 3.5 6.3 5.2
正常值（g/L） 0.15±0.06 0.16±0.03 0.12±0.04 0.127±0.037 0.12±0.03 0.11±0.03

（源自：刘秉文，1995.）