一、亮度法

1．原理

血清中游离脂肪酸经抽提到高密度铜试剂中，形成铜皂在上层溶剂中，再用二苯卡巴肼与铜显色，进行定量。

2．试剂组成

代号	种类	浓度	组成	贮存2～8℃	有效期
R-1	抽提剂		氯仿：庚烷：甲醇=5：5：1（V/V）
R-2	缓冲液	33mmol/L	KH2PO44.539g/L 100ml+Na2HPO4·2H2O5.983g/l 50ml调pH至6.4
R-3	铜贮液	500mmol/L	Cu（NO3）2·3H2o 12.07g加H2O→100ml
R-4	三乙醇胺	1.0mol/L	三乙醇胺10ml，加水→100ml
R-5	NaOH液	1mol/L
R-6	铜试剂		R-3 10ml+R-4 10ml+R-6 6ml +H2O→100ml调pH至8.1
R-7	二苯卡 巴肼液		二苯卡巴肼（乙醇）液（4g/L）10ml+R-4 0.1ml		临用前配制
R-8	软脂酸标准贮存液	2mmol/L	软脂酸51.2mg溶于100ml R-1液	冷藏
R-9	R-8的应用液	500μmol/L	用R-1液稀释	冷藏

3．操作

按图15-7操作。

4．计算

血清游离脂肪酸（μmol/L）=E_SA/E_ST×500

二、酶法

1．原理

血清中游离脂肪酸或非酯化脂肪酸（NEFA），经酶试剂作用生成紫色化合物，其颜色深浅与NEFA含量成正比。

2．试剂组成

代号	种类	组成	浓度贮存	贮存
R1	缓冲液	磷酸缓冲液 MgCl2液 去垢剂	0.04mmol/LpH6.9 3mol/L
R2	酶/辅酶	乙酰CoA合成酶 抗坏血酸氧化酶 CoA ATP 4-AAP 溶于10ml R1液中	≥0.3U/ml ≥1.5U/ml 0.9mmol/L 5.0mmol/L 1.5mmol/L	冷藏5日
R3	酶稀释液	苯氧乙醇 去垢剂	0.3%(V/V)
R4		马来酰亚胺 该试剂与R3等体积混合	10.6mmol/L
R5	酶试剂	乙酰CoA氧化酶 过氧化物酶 TOOS 混合上述试剂，再等体积R4试剂混合	≥10U/ml 7.5U/ml 0.2mmol/L	冷藏5日
R6	标准液		1mmol/L	冷藏

*应用带玻塞离心管

3．操作

按图15-8操作。

4．计算

图15-7 血清非酯化脂肪酸测定(光度法)操作图

图15-8 血清非脂化脂肪酸测定（酶法）操作图

（胡汉宁　储建中）